无缝HPLC方法转移

7月16日2021年

作者：Brigitte Bollig博士代表Shimadzu Europa Gmbh

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HPLC用于分析目标化合物及其在各种应用中的相关杂质，并在自己的原始分析条件和/或指定的测试法规中创建方法。如果这些经过验证的方法与几种不同的HPLC仪器一起使用，则系统之间的可重复性（可比性）是测量的重要因素和可重复性。

特别是由于方法转移，梯度洗脱，保留时间，解决方案和其他因素将在很大程度上受到影响。例如，尽管现有方法可能会成功地将目标化合物与一个系统中的共存杂质分开，但同一方法可能无法成功将这些化合物分离在其他单元中。
因此，通常需要优化每种仪器的分析条件，这是一个非常耗时的过程。保留时间和分离的这种变化是由单元之间的多种系统量和泵性能引起的。尤其是在超高速度分析中，由于少量专用柱，系统体积的差异也很小，也会在分析结果中引起重大影响。

系统量和梯度延迟

将方法从一个LC单元转移到另一个LC时，必须考虑系统体积差异。图1显示了从流动相储层到LC仪器柱的流线。梯度延迟体积是指混合两个或多个洗脱液的点和柱入口之间的系统体积。如图1所示，对于低压梯度系统，梯度延迟体积不同。即使对于相同类型，管道的不同长度和/或内部直径也可以提供不同的梯度延迟体积。
图2显示了梯度延迟如何影响分离。通常，即使梯度已经开始在时间计划上，其实际开始时间（增加有机溶剂浓度的时间）也会延迟。图3显示了具有较大系统体积（较低色谱图）的单元中的梯度如何比具有较小系统体积（上层色谱图）的仪器中的时间晚。这可能会在不同的HPLC上引起不同的分离模式。因此，在传输方法时必须考虑系统量差，并且必须通过调整初始保留时间（梯度启动时间）来修改梯度程序。然而，当测试法规严格定义分析条件时，不能仅仅适应这些程序。

使用校正的系统延迟量的方法传输的示例

在讨论了通过方法传输及其来源引起的色谱图的差异之后，下一部分描述了使用具有不同系统量的多个LCS进行分析和方法传输的示例。Shimadzu LC-2050集成LC单元用于将延迟体积与各种仪器匹配，然后通过与不同的LC进行相同的分析来比较色谱图。
第一部分将色谱图与先前的Shimadzu LC-2030 Plus模型进行了比较。结果如图3所示。该比较证实，在相同的分析条件下，LC-2030 Plus旨在具有相当于LC-2050的系统体积，从而产生相同的色谱图。
将下一个色谱图与另一个供应商的LC系统和第一代Shimadzu LC-2010C HT Integrated LC进行了比较。结果如图4所示。在此示例中，其他供应商的LCS（系统A）和LC-2050的系统量是等效的，因此在相同的分析条件下，它们产生了等效的结果。
但是，与LC-2050相比，LC-2010C HT具有较大的系统量，因此将延迟体积兼容套件添加到LC-2050中以匹配系统量。与前一种情况一样，这导致了几乎相同的色谱图模式。因此，在传输方法时，重要的是要匹配系统量以便同时启动梯度。

分析条件转移和优化函数

分析条件转移和优化（ACTO）是一种有效的方法传输工具，也是Shimadzu Labsolutions软件的最新版本的一部分。Acto的功能之一称为“梯度启动时间调整功能”。
将分析方法从现有的LC仪器转移到另一个单元可能会导致保留时间差异，因为系统体积和溶剂输送单元的规格差异。如图5所示，可以使用Acto的梯度启动时间调整功能解决此问题。
梯度调整功能是在方法创建过程中配置的。如果用户只是简单地输入系统量的差异，则在分析过程中会自动添加校正的初始保留时间或自动减去。这可以在方法传输之前和之后获得相同的色谱图。
该函数还可以纠正兼容套件无法考虑的微妙错误（例如泵特性和溶剂输送机制），并且可以实现最佳兼容性。此调整与时间程序分开配置。因此，对现有时间计划的重新配置是不必要的。因此，Shimadzu的I系列仪器和ACTO功能可以在各种应用中的方法传输过程中提供更高的效率和可靠性。

使用Acto功能的方法传输

在此示例中，LabSolutions Workstation软件功能用于匹配方法传输的系统延迟量，而不是通过更改搅拌机或管道。在图6中，用Shimadzu LC-2060C 3D MT和不同的供应商LC仪器（系统B）分析了防晒混合物样品。
在LC-2060C 3D MT（HPLC和UHPLC流线）中可用的两条流线中，使用了HPLC流量线。尽管在两个单元上都应用了相同的方法，但由于两种仪器的系统体积差异，10分钟后的峰不匹配。使用Acto的梯度启动时间调整功能，对梯度启动时间进行了调整，以克服系统量的差异并进行分析。
在此之后，如图6的末尾所示，对于所有峰值，保留时间几乎相同。使用这种方法，可以通过设置梯度启动时间来实现两个不同系统的兼容性，并且这使得启用了平滑的方法传输。请注意，各自的药典允许调整初始保留时间，并且不被视为更改该方法，因此通常不需要重新验证。