有所谓的免费的激素吗?机会在线TFC-LC-MS / MS分析无血清类固醇——迈克尔·赖特,刘易斯寇奇曼说:“&大卫J Halsall

大多数的类固醇和其他小分子激素广泛绑定到载体蛋白在血液中的。虽然有争论关于这些载体蛋白的功能是有大量的证据表明,游离或“免费”激素的浓度是最激素的生物学和临床相关的测量活动。这通常被认为是“自由激素假说”[1],基本假设是:i)的激素受体只能通过释放激素,:2)激素:蛋白质复合体是毛细血管床无法溢出。

不幸的是,自由激素的测量提出了分析和理论挑战。许多激素有能力结合几个血浆蛋白,能力和绑定常量为这些不同的蛋白质可以随至少四个数量级。许多特定的激素结合蛋白sub-nanomolar离解常数,免费的激素的浓度可以picomolar范围和约束自由比堆放大量免费的激素。理论上,免费激素测量提出了一个问题类似于不确定性原则[2]——也就是说,任何试图衡量自由激素的浓度会扰乱绑定平衡。尽管这些问题毫无疑问,目前的方法估计的免费分数某些激素的临床意义。例如,英国临床实验室使用模拟免疫测定测量测量游离甲状腺素(FT4)的诊断甲状腺疾病(尽管这种方法还没有公认的在美国)。相比之下,几乎所有实验室估计总而不是免费的甾类激素的浓度,尽管相当多的文献显示这些方法[3]的不足。这主要是由于缺乏一个简单、可靠的方法来测量自由类固醇激素。与FT4模拟免疫测定方法对类固醇怀疑(4、5)。

临床实验室越来越吸引质/ MS仪器定量的类固醇和其他小分子激素,由于优越的分析选择性相比,目前使用的免疫分析方法。一个有吸引力的解决问题的常规自由激素分析在临床实验室将合并MS / MS的选择性与在线检测方法,有能力解决无激素。当代方法选择性结合蛋白沉淀等方法,平衡透析或超滤[6],受技术和实际限制,没有特别适合在线MS / MS方法,特别是对常规高通量分析。

在本文中,我们描述我们的调查,使用血清睾酮作为一个例子,一个应用程序的一个简单的在线,基于列的提取系统分离的束缚和自由激素之前由MS / MS分析高效液相色谱法分离和定量。