发展的一种改进方法,大麻效能分析利用高效液相色谱/ PDA UHPLC偏好

大麻测试实验室的数量扩张,越来越多的国家采用了使用药用大麻和/或娱乐项目。能力测试时特别关注的大麻是被用于医疗或研究。因此,分析标准大麻的主要成分是至关重要的。历史上关于方法的鲁棒性分析方法有缺点,样本周转时间长。这手稿描述了一个简单的发展,准确,并可再生的色谱分离和定量分析方法的七个主要大麻类大麻提取物的高效液相色谱(HPLC)和光电二极管阵列(PDA)检测,使用一个小型(表面多孔粒子)列。

介绍

在美国,联邦受控物质法案1970 (CSA)使非法的使用和持有大麻为任何目的。根据CSA,大麻被列为一个时间表我物质,这意味着它有一个高潜在滥用和不接受医疗用途,从而禁止甚至医疗使用的药物[1]。在州一级,但是,政策对于医疗和娱乐使用大麻有很大区别,和许多国家政策与联邦法律冲突了。

1996年,加州成为第一个医学使用大麻合法化的州。此后更多的州已经颁布了大麻项目,最近的是佛蒙特州在2018年1月成人使用大麻合法化。截至2018年3月,29个州、哥伦比亚特区,关岛,波多黎各公共医疗大麻大麻和项目实施。另一个17个州批准药用产品有高水平的大麻二酚(CBD),大麻的non-psychoactive组件,只要产品有低水平的精神成分四氢大麻醇(THC)。这些“CBD高/低THC”项目通常包括限制类型的医疗条件,这类产品可以使用[2。在2012年和2018年之间,九个州和哥伦比亚特区扩大项目包括零售/成人的娱乐用途的大麻[3]。

的合法性和使用大麻已经蔓延全国,所以有其培养,同时,分析实验室进行的国家,需要测试的大麻作物[4]。全面的大麻测试涵盖了一系列的目标,包括THC和CBD,萜烯、微生物和农药污染物,重金属通过培养期间从土壤中吸收。所有这些参数的问题,可靠和准确的分析方法是关键,确保质量、安全性和效力的大麻产品。

能力测试时特别关注的大麻是被用于医疗或研究。因此,分析标准大麻的主要成分是至关重要的。天然的大麻类,大麻植物的主要生物活性成分,形成一组密切相关的复杂化合物的113和70。主要的重点是Δ9-tetrahydrocannabinol (THC),大麻的主要活性成分,由于其精神,药理学和毒理学特性,严格的法律限制已经执行。然而,分析实验室还必须关注Δ9-tetrahydrocannabinolic酸(THC-A),天然THC的前兆,容易脱羧THC在干燥和/或加热的大麻。

许多努力规范大麻测试使用不同的大麻类方法开发的标准解决方案。然而,化合物的复杂矩阵在大麻非常不同于纯粹的标准解决方案,因此,开发可再生的方法用于整个测试需要使用实际的大麻大麻样品[5]。

气相色谱/质谱(GC / MS)历来用于化合物的分离和定量的兴趣大麻。然而,限制使用GC的大麻素分析包括区分THC和THC-A。为了获得不同的数据这两个化合物,额外的过程必须完成derivatise样本所以THC-A不是转换为热量THC的注入[6]。

这手稿描述了色谱分离和定量的分析方法的七个主要大麻类c .提取马唐与PDA检测高效液相色谱法。该方法简单、准确、重现性好,提供了改进的周转时间,排除了一些挑战的GC / MS分析大麻组件和UHPLC成本。

实验

硬件/软件

美国一个PerkinElmer®(谢尔顿,CT) Flexar™高效液相色谱系统使用PDA光电二极管阵列检测器和附带的cd系统。一个PerkinElmer Brownlee™SPP C18 2.7µm 3.0×150毫米列是用于所有分析。

LC参数

表1中列出了LC方法参数。

溶剂、标准
和样品

所有的溶剂和稀释剂使用高效液相色谱级,通过0.45 -µm过滤器过滤。稀释剂都是80:20甲醇/水。1毫克/毫升(1毫升的甲醇)的标准Δ9-tetrahydrocannabinol (THC)Δ9-tetrahydrocannabinolic酸(THC-A)大麻二酚(CBD), cannabidiolic酸(展览业cannabigerol (cbre),大麻酚(CBN)和cannabichromene (CBC)获得Sigma-Aldrich®, Inc .(美国宾夕法尼亚州阿伦敦)和Restek公司(美国宾夕法尼亚州Bellefonte)。

100 -µg /毫升工作标准的七个标准准备通过添加1毫升的每个标准10毫升容量瓶和填充标记80:20甲醇/水稀释剂。这工作标准还担任过6级校准标准。校准标准50、20日5、1,0.5µg /毫升然后通过连续稀释的准备工作标准。

四5毫升准备大麻提取样本,通过D,获得从3 b分析®(波特兰,或美国),一个大麻的测试实验室。实验室准备通过添加10毫升的甲醇提取物一克干和地面大麻花。样本然后涡三分钟紧随其后的过滤2毫升的上层清液使用0.45 -µm过滤器。上层清液过滤然后用甲醇稀释三倍。这导致了整体30倍浓度稀释对最初的产品。收到,每个样本进一步稀释100倍稀释剂和制冷下举行。

这相当大的稀释浓度范围内保持calibrants所需-100µg /毫升(0.5)。大麻素标准商业(合法)只获得1毫克/毫升。因此,一旦准备作为校准混合的一部分,个人分析物浓度在最高水平100µg /毫升。这个水平大大低于预计一些大麻类未稀释的大麻提取物,尤其是THC-A;因此,大量稀释样品的要求。所有calibrants和样本随后0.45 -µm过滤器过滤,然后注射(4µL)。

结果与讨论

图1显示了一个标准的混合物的色谱大麻类七个目标,所有在四分钟内分离。梯度坡道是由于高端calibrants的浓度相对较低,同样,有限的获得浓度标准。如图2所示,色谱可重复性是演示了通过十复制注射100 - ppm标准的混合物。所有峰的保留时间%相对标准偏差小于0.05%。这证实了这种色谱方法的性能可靠,这是至关重要的,以确保结果的完整性药用大麻的分析。在药用大麻行业,自信的产品组合是至关重要的帮助,以确保发布的安全产品。

代表6级线性情节THC和THC-A,如图3所示。上面的所有七个大麻类R2值0.999。,如表2所示,定量限(定量的限制)为每个大麻素校准标准的基础上建立了响应。定量限(≥10 S / N)是所有分析大麻类≤0.10µg /毫升。作为高端力量大麻类通常测试,这些定量限浓度远低于当前主要的大麻类是感兴趣的分析。

图4显示了为每个样品色谱结果。色谱相比,没有一个样品都没有显示检测到的CBN水平,只有样本显示,任何CBC的检测量。样品出现了完全不同于其他人,它包含一个大大大比例的展览业,和THC和THC-A明显较低。它也是唯一样本发现含有quantitatable CDA和未知矩阵组件,淋洗展览业的背面。否则,样品B, C, D出现非常相似。

表3显示了七个目标的检测浓度大麻类在每个样本。3 b的浓度检测验证分析,同意通过一个独立的基于分析获得的预期值。样品展出展览业浓度显著提高,因此,指向一个outlier-type大麻应变,峰值的相当大的兴趣可能药用用途。示例B显示THC-A的最高浓度,设置它有别于其他样品,使其相对领先娱乐用途。C和D样品很相似,色谱和定量,暗示他们来自类似大麻菌株。

结论

本研究证明了有效的色谱分离和定量七大麻类,包括THC和THC-A,大麻提取物HPLC和PDA。提供特殊的线性方法为每个七大麻类测试浓度范围,和示例结果验证是由独立的色谱分析所得结果一致。

分离是通过传统的高效液相色谱法,使用一个SPP列,在不到4分钟,从而减少周转时间,避免与UHPLC相关成本越高。PDA定量提供了出色的灵敏度,从而排除由质谱定量的必要性。

确认

作者要感谢梅根·布洛克的3 b分析请提供准备和提供样品提取用于这项研究,以及提供产品详细信息,帮助分析和验证样本的结果。

引用

1。美国司法部(Department of Justice),美国毒品管制机构。DEA在大麻上的立场。2013年4月。

2。全国州议会会议的。国家医用大麻的法律。2018年3月28日。http://www.ncsl.org/research/health/state-medical-marijuana-laws.aspx # 2。2018年3月29日通过。

3所示。全国州议会会议的。深潜水:大麻。http://www.ncsl.org/bookstore/state-legislatures-magazine/marijuana-deep-dive.aspx。2018年3月29日通过。

4所示。坦,b .大麻测试服务一个光明的未来。实验室经理11(9):10到16。2016年10月。

5。Egerton, d .定义大麻在绿色市场标准。2017年2月17日。https://www.labcompare.com/10-Featured-Articles/333962-Defining-Cannabis-Standards-in-a-Green-Market/。2018年3月29日通过。

6。詹姆斯,A气相色谱:大麻素分析的有力工具。色谱法今天11 (1):40-43。2月/ 2018年3月。